「ポリアクリルアミドゲル電気泳動」の版間の差分

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== 原理 ==
ポリアクリルアミドは[[アガロースゲル電気泳動|アガロース]]よりもさらに[[分子篩|分子ふるい]]効果が大きく、タンパク質や比較的低分子量の核酸を分離するのに適している。
 
=== 核酸のPAGE ===
[[デオキシリボ核酸|DNA]]、[[リボ核酸|RNA]]などの核酸[[分子]]はマイナスの[[電荷]]を持つため陽極方向に移動する。分子ふるい効果により[[分子量]]の小さいものほど長く泳動される。核酸分子は[[尿素]]などの[[変性]]剤の存在下で直線状の1本鎖となり、その長さに応じて精密に分離される。末端に特定の[[塩基]]を有するDNA断片をこの方法で泳動すると、その長さに相当する位置にのみDNAが検出されるので、[[塩基配列]]の決定('''[[シークエンス|シークエンシング]]''')に用いられる。
 
[[画像ファイル:SDS-PAGE.jpg|thumb|230px|SDS-PAGEの例。左1列が分子量を決めるためのマーカー、右5列が分析対象のタンパク質。(出典:英語版"SDS-PAGE")]]
 
=== SDS-PAGE ===
タンパク質の荷電は種類によって大きく異なるが、陰イオン系[[界面活性剤]]である[[ラウリル硫酸ナトリウム|ドデシル硫酸ナトリウム]](SDS) (SDS) 存在下ではSDS分子がタンパク質分子を[[変性]]させ[[ミセル]]を作るため、タンパク質分子は全体として陰性に荷電し陽極方向に移動する。この方法がSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動('''SDS-PAGE'''=エスディーエスペイジ=と略す)で、核酸の場合と同様に分子量による分離が行える。通常は、タンパク質試料に[[還元剤]]である[[2-メルカプトエタノール]]を加えて煮沸し、S-S結合([[ジスルフィド結合]])を切断してから電気泳動するが、これによって分子量を反映した泳動結果が得られる。
泳動後のタンパク質をメンブレンに転写してから[[免疫染色]]を行う手法を[[ウエスタンブロッティング]]と呼ぶ。
 
=== native PAGE ===
native PAGEは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動(PAGE) (PAGE) の一種で、変性したタンパク質を還元してから泳動するSDS-PAGEと異なり、未変性のまま泳動するものをさす。タンパク質の[[等電点]]、分子量の他に、高次構造や複合体形成の影響で泳動が変化するため、目的のタンパク質のバンドがどこに出るか予測するのは難しい。塩基性のタンパク質は陰極側に泳動してしまうので注意を要する。変法にはBlue Native PAGE (BN-PAGE) があるが、これは[[クマシーブリリアントブルー]]色素を用いて、タンパク質を未変性のまま負に帯電させて泳動するもの。
 
=== 等電点電気泳動 ===
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